Odpowiedź:
Obecnie procedurę prowadzi się z użyciem gotowych zestawów a jej szczegółowy przebieg zależy od rodzaju materiału biologicznego oraz stosowanych metod lecz ogólnie proces wygląda następująco:
Zniszczenie komórek przez homogenizację lub lizę w celu wydostania cząstek DNA do roztworu. Zwykle proces ten prowadzi się przez zastosowanie odczynników lizujących lub metodami fizycznymi takimi jak mieszanie, rozcieranie, czy niszczenie ultradźwiękami.
Usunięcie błon lipidowych oraz dalszy rozpad komórek przez dodanie detergentu lub surfaktantu.
Usunięcie białek przez dodanie proteazy (niektóre protokoły pomijają ten krok).
Usunięcie RNA przez dodanie RNazy (niektóre protokoły pomijają ten krok).
Oczyszczenie DNA z detergentów, białek, soli i innych składników dodanych do mieszaniny w poprzednich krokach. Zwykle stosuje się jedną z metod:
Precypitacja w alkoholu prowadzona zwykle z użyciem zmrożonego etanolu lub izopropanolu. Dodatek alkoholu powoduje wytrącenie DNA które osadza się na dnie probówki po odwirowaniu. Stopień precypitacji rośnie wraz ze zwiększaniem siły jonowej roztworu zwykle przez dodatek octanu sodu.
Ekstrakcja fenol-chloroform. Fenol denaturuje białka w próbce które po odwirowaniu pozostają w fazie organicznej natomiast w fazie wodnej znajdują się kwasy nukleinowe zmieszane z chloroformem. (Dla DNA stosuje się mieszaninę z dodatkiem buforu o pH = 8 natomiast w przypadku RNA stosuje się zakwaszony fenol)
Oczyszczanie na mikrokolumnach wirówkowych wykorzystujące zjawisko adsorpcji kwasów nukleinowych na ziarnach krzemionki(lub innego adsorbentu). Adsorpcja zależy od użytego pH roztworu oraz zawartości soli.
Techniki izolacji mogą być modyfikowane o dodatek odczynników chelatujących jony takie jak Mg2+ oraz Ca2+ co chroni DNA przed strawieniem przez DNazy (jony te są niezbędne do prawidłowej pracy niektórych enzymów).
Po izolacji oczyszczone DNA jest rozpuszczane zwykle w lekko zasadowym buforze TE lub w wodzie wysokiej czystości.
